Ah Receptor CRISPR Activation Plasmid (m): sc-419054-ACT

Das Mausgen **Ahr** kodiert den Aryl-Hydrocarbon-Rezeptor (AhR), einen ligandenaktivierten Transkriptionsfaktor, der Xenobiotika und endogene Metaboliten erkennt, um Genexpressionsprogramme zu steuern, die Entgiftung, Barrierefunktion und Immunmodulation kontrollieren. Nach Aktivierung transloziert AhR in den Zellkern, heterodimerisiert mit ARNT und bindet an Xenobiotic-Response-Elemente, um Zielgene wie **Cyp1a1/Cyp1b1** zu induzieren; dabei integriert er Signale aus oxidativem Stress, Entzündungswegen und Stoffwechselpfaden. Die AhR-Aktivität beeinflusst die Differenzierung von T‑Zellen, die Polarisation von Makrophagen, die epitheliale Homöostase sowie zirkadian assoziierte transkriptionelle Netzwerke. Eine fehlregulierte AhR-Signalgebung wurde in experimentellen Mausmodellen mit einer veränderten Anfälligkeit für entzündliche Erkrankungen, Toxikantantworten und der Biologie des Tumormikromilieus in Verbindung gebracht.

Ah Receptor Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Ahr-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Ah Receptor Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Ahr-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Ahr-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Ah Receptor-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Ahr-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Ah Receptor-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Ah Receptor-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Ahr-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.