Plásmido Doble Nickase (m) AGS3: sc-426766-NIC

El gen murino **Gpsm1** codifica el activador de la señalización por proteínas G 3 (AGS3), un regulador multidominio que se une a subunidades Gαi/o cargadas con GDP mediante sus motivos GoLoco y modula el ciclo de las proteínas G heterotriméricas de forma independiente de la activación canónica de los GPCR. AGS3 influye en la señalización de segundos mensajeros y en el tráfico de receptores, configurando vías aguas abajo que controlan la polaridad celular, la dinámica vesicular y la organización del citoesqueleto. En el sistema nervioso, AGS3 se asocia con la plasticidad sináptica y con respuestas adaptativas a señales neuromoduladoras, mientras que en otros tejidos contribuye a un control dependiente del contexto de comportamientos proliferativos y migratorios. Las redes de señalización de proteínas G desreguladas en las que participa AGS3 se estudian en fenotipos neuroconductuales y en la reprogramación de la señalización asociada a la biología tumoral, lo que convierte a **Gpsm1** en un objetivo útil para la interrogación mecanística de vías.

AGS3 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Gpsm1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Gpsm1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Gpsm1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Gpsm1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.