Plasmide Double Nickase (h) Agmatinase: sc-405176-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Agmatinase correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Agmatinase Double Nickase (h) et le plasmide Agmatinase Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant AGMAT. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Agmatinase Antibody (G-12): sc-166414
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Agmatinase | sc-405176-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Agmatinase | sc-405176-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AGMAT code l’agmatinase, une métalloprotéase dépendante du manganèse qui hydrolyse l’agmatine en putrescine et urée, reliant le métabolisme de l’agmatine dérivée de l’arginine au réseau biosynthétique des polyamines. En régulant la disponibilité de la putrescine, l’agmatinase influence les réserves en aval de spermidine et de spermine, qui soutiennent le compactage des acides nucléiques, le contrôle de la traduction et la progression du cycle cellulaire. L’activité d’AGMAT s’entrecroise avec les flux d’arginine liés à l’oxyde nitrique et les réponses au stress cellulaire en modulant l’agmatine, une amine bioactive aux rôles neuromodulateurs et de signalisation métabolique. Une homéostasie des polyamines dérégulée et une altération du métabolisme agmatine/arginine ont été associées à la biologie du cancer, à la neurobiologie et à des phénotypes inflammatoires, faisant d’AGMAT une cible utile pour des études mécanistiques du remodelage métabolique.
Agmatinase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AGMAT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AGMAT. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AGMAT. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AGMAT.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.