AFF4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406238

Übersicht

AFF4 (AF4/FMR2-Familienmitglied 4) kodiert einen nukleären transkriptionellen Regulator, der als zentrale Komponente des Super Elongation Complex (SEC) fungiert und den Übergang der RNA-Polymerase II in die produktive Elongation koordiniert. Über Interaktionen mit Elongationsfaktoren wie P-TEFb und ELL-Proteinen unterstützt AFF4 die schnelle Induktion stimulusresponsiver Gene und beeinflusst chromatinassoziierte Transkriptionsprogramme. Die AFF4-abhängige Kontrolle der transkriptionellen Elongation trägt zur Regulation von Zellidentität, Proliferation und Stressantwort-Signalwegen bei. Eine fehlregulierte SEC-Aktivität und veränderte, AFF4-assoziierte Transkriptionsschaltkreise sind relevant für onkogene Genexpressionsprogramme und andere Erkrankungen, die durch abweichende Elongation der RNA-Polymerase II getrieben werden.

Das AFF4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des AFF4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des AFF4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von AFF4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die AFF4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von AFF4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der AFF4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf AFF4-Exone abzielen, die für die AFF4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere AFF4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom AFF4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom AFF4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des AFF4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das AFF4 HDR-Plasmid (h) und AFF4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von AFF4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten AFF4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.