Plasmide Double Nickase (h) ADSL: sc-404936-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ADSL correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ADSL Double Nickase (h) et le plasmide ADSL Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ADSL. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ADSL Antibody (C-11): sc-365623
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ADSL | sc-404936-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ADSL | sc-404936-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’adénylosuccinate-lyase (ADSL) est une enzyme bifonctionnelle de la biosynthèse de novo des purines qui catalyse la conversion de l’adénylosuccinate en AMP et du SAICAR en AICAR, reliant ainsi le métabolisme des nucléotides à l’équilibre énergétique cellulaire et à la capacité proliférative. En régulant les réserves de nucléotides puriques et les intermédiaires de la voie, l’activité d’ADSL influence la synthèse de l’ADN/de l’ARN, les réponses au stress de réplication et la signalisation métabolique dans les cellules à division rapide. Des variants avec perte de fonction du gène ADSL chez l’humain perturbent l’homéostasie des purines et sont associés au déficit en adénylosuccinate-lyase, un trouble neurométabolique caractérisé par l’accumulation de succinylpurines et une altération du neurodéveloppement. En recherche, ADSL est étudiée afin d’analyser la dynamique des purinosomes, le contrôle métabolique de l’expression génique et la contribution des perturbations de la voie des purines aux phénotypes de stress cellulaire.
ADSL Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ADSL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ADSL. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ADSL. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ADSL.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.