Plásmido Doble Nickase (h) ADRP: sc-400802-NIC

PLIN2 codifica la proteína relacionada con la diferenciación del tejido adiposo (ADRP), un miembro de la familia de las perilipinas asociadas a gotículas lipídicas que recubre los orgánulos de almacenamiento de lípidos neutros y regula el tráfico de ácidos grasos, el depósito de triglicéridos y la lipólisis. ADRP participa en la biogénesis y el recambio de las gotículas lipídicas mediante interacciones con programas lipogénicos controlados por la señalización de PPAR y por vías celulares de detección de nutrientes, modulando el metabolismo oxidativo y las respuestas inflamatorias. La expresión alterada de PLIN2 y la acumulación de gotículas lipídicas se estudian con frecuencia en contextos de esteatosis hepática, disfunción metabólica asociada a la obesidad, formación de células espumosas en macrófagos y estrés lipídico en células cancerosas. Como marcador y regulador del almacenamiento lipídico intracelular, ADRP se utiliza ampliamente para investigar la homeostasis lipídica, la dinámica de orgánulos y la reprogramación metabólica en modelos de células humanas.

ADRP El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PLIN2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PLIN2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PLIN2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PLIN2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.