Plásmido Doble Nickase (h) ADPN: sc-406096-NIC

PNPLA3 codifica la adiponutrina (ADPN), una fosfolipasa tipo patatina localizada en las gotas lipídicas que regula la hidrólisis de triglicéridos y la actividad aciltransferasa en hepatocitos y adipocitos. ADPN integra señales nutricionales y hormonales para modular la remodelación lipídica, el acoplamiento con la lipogénesis de novo y el recambio de las gotas lipídicas, conectando el estado metabólico con el almacenamiento intracelular de lípidos. La variación genética y la alteración de la expresión de PNPLA3 se asocian fuertemente con la acumulación de grasa hepática y la progresión de fenotipos de hígado graso, y se estudian en el contexto de la esteatosis, la inflamación y la señalización fibrogénica. Como resultado, PNPLA3/ADPN se utiliza ampliamente como punto de entrada molecular para investigar las vías del metabolismo lipídico y sus respuestas de estrés aguas abajo en modelos celulares humanos.

ADPN El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PNPLA3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PNPLA3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PNPLA3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PNPLA3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.