ADHγ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402261

Descripción general

ADH1C codifica la subunidad gamma de la alcohol deshidrogenasa humana (ADHγ), una oxidorreductasa citosólica dependiente de zinc que cataliza la oxidación de etanol y otros alcoholes y aldehídos de cadena corta dependiente de NAD⁺. Esta actividad enzimática respalda el metabolismo del alcohol y de los retinoides y se relaciona con la homeostasis redox celular al influir en el equilibrio NADH/NAD⁺ y en las vías posteriores de procesamiento de aldehídos. La variación o desregulación del flujo metabólico asociado a ADH1C puede modular la carga de acetaldehído y las respuestas al estrés oxidativo, procesos implicados en el daño hepático, el metabolismo de carcinógenos y fenotipos metabólicos más amplios. Como parte del clúster génico de ADH, ADHγ también es relevante para estudios de desintoxicación específica de tejido y del procesamiento de xenobióticos en la biología hepática y del tracto aerodigestivo superior.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ADHγ (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ADH1C en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ADH1C junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ADH1C tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ADHγ.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ADH1C para la investigación de la señalización de ADHγ, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ADH1C críticos para la función de ADHγ
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ADH1C para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ADHγ CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ADHγ CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ADH1C. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ADHγ (h) y el plásmido HDR ADHγ (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ADH1C para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ADH1C definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.