Plasmide CRISPR/Cas9 KO ADF (h): sc-417540

Présentation

Le gène humain **DSTN** code le facteur de dépolymérisation de l’actine (**ADF**), une protéine centrale de liaison à l’actine qui sectionne et dépolymérise la F-actine afin d’assurer le renouvellement des filaments et de maintenir l’homéostasie du cytosquelette. En régulant la dynamique de l’actine, ADF soutient des processus tels que le remodelage des lamellipodes, l’endocytose, la cytocinèse et la migration cellulaire, et s’inscrit fonctionnellement à l’interface des voies de signalisation des GTPases de la famille Rho et des réseaux de phosphorylation régulatrice de cofiline/ADF. Des altérations du remodelage de l’actine sont associées à des défauts d’intégrité de la barrière épithéliale, de morphogenèse neuronale et à des comportements cellulaires invasifs, faisant de **DSTN** un nœud pertinent pour l’étude de phénotypes pathologiques pilotés par le cytosquelette. La perturbation de **DSTN** est donc utile pour analyser comment les flux d’actine influencent la mécanotransduction, la signalisation d’adhérence et les réponses au stress dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ADF (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DSTN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DSTN, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DSTN à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ADF.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DSTN pour l'étude de la signalisation de ADF, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DSTN essentiels à la fonction de ADF
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DSTN pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ADF plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ADF plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DSTN. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ADF plasmide HDR (h) et le ADF (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DSTN pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DSTN définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.