Plásmido CRISPR de Activación (m) Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3: sc-430515-ACT

El gen Adcy3 del ratón codifica la adenilato ciclasa 3 (AC3/ADCY3), una enzima asociada a la membrana que convierte ATP en AMPc para acoplar la señalización mediada por GPCR a las vías efectoras posteriores de PKA y EPAC. La producción de AMPc dependiente de ADCY3 configura programas transcripcionales dependientes del estímulo a través de CREB y ayuda a coordinar respuestas celulares como la detección metabólica, la señalización neuroendocrina y procesos secretores regulados y neuronales. En ratones, la función de Adcy3 se estudia con frecuencia en contextos en los que la dinámica del AMPc controla el equilibrio energético y la transducción sensorial, aportando vínculos mecanísticos con fenotipos relacionados con la obesidad y una desregulación metabólica más amplia. Como nodo de señalización, ADCY3 también es relevante para analizar el diálogo cruzado entre entradas de GPCR y el control por segundos mensajeros de la expresión génica.

Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Adcy3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Adcy3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Adcy3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Adcy3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 en células tumorales con expresión de Adcy3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.