Plasmide Double Nickase (h) adenosine deaminase: sc-402201-NIC

L'ADA humaine code l'adénosine désaminase, une enzyme clé du métabolisme des purines qui désamine de façon irréversible l'adénosine et la désoxyadénosine en dérivés de l'inosine, contribuant ainsi au maintien de l'équilibre des pools nucléotidiques. En contrôlant les concentrations d'adénosine intracellulaires et extracellulaires, l'ADA influence les voies de sauvetage, la capacité de synthèse de l'ADN et la signalisation liée aux récepteurs de l'adénosine, qui façonne l'activation et la différenciation des cellules immunitaires. L'activité de l'ADA est étroitement liée au développement des lymphocytes et à leur aptitude à proliférer, et une altération de sa fonction est fortement associée à des phénotypes d'immunodéficience ainsi qu'à une dysrégulation immunitaire plus large. Par conséquent, l'ADA est largement étudiée en biologie des leucocytes, dans les réponses au stress nucléotidique et au sein des réseaux de signalisation liés à l'inflammation.

adenosine deaminase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ADA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ADA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ADA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ADA.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.