adenosine deaminase Double Nickase Plasmid (h): sc-402201-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das adenosine deaminase Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- adenosine deaminase Double-Nickase-Plasmid (h) und adenosine deaminase Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ADA abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: adenosine deaminase: sc-28346
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
adenosine deaminase Double Nickase Plasmid (h) | sc-402201-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
adenosine deaminase Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402201-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Die humane ADA kodiert die Adenosin-Deaminase, ein Schlüsselenzym des Purinstoffwechsels, das Adenosin und Desoxyadenosin irreversibel zu Inosin-Derivaten desaminiert und so zur Aufrechterhaltung des Gleichgewichts der Nukleotidpools beiträgt. Durch die Kontrolle der intra- und extrazellulären Adenosinspiegel beeinflusst ADA Salvage-Wege, die Kapazität der DNA-Synthese sowie die an Adenosinrezeptoren gekoppelte Signalübertragung, die Aktivierung und Differenzierung von Immunzellen prägt. Die ADA-Aktivität ist eng mit der Lymphozytenentwicklung und der proliferativen Fitness verknüpft; eine gestörte ADA-Funktion ist stark mit Immundefizienz-Phänotypen und einer weiterreichenden Fehlregulation des Immunsystems assoziiert. Daher wird ADA breit in der Leukozytenbiologie, bei Nukleotid-Stressantworten und in entzündungsbezogenen Signalnetzwerken untersucht.
adenosine deaminase Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ADA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ADA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ADA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ADA-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.