Adducin β Double Nickase Plasmid (h): sc-402277-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Adducin β Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Adducin β Double-Nickase-Plasmid (h) und Adducin β Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ADD2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Adducin β: sc-376063
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Adducin β Double Nickase Plasmid (h) | sc-402277-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Adducin β Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402277-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADD2 kodiert Adduzin β, ein membrannahes Zytoskelettprotein, das mit Adduzin α/γ Heterotetramere bildet, um Aktinfilamente zu kappen und zu bündeln und den Aufbau des Spektrin–Aktin-Netzwerks am kortikalen Zytoskelett zu fördern. Durch die Regulation des Aktin-Remodelings und der Membranstabilität trägt Adduzin β zur Kontrolle der Zellform, zur Dynamik von Zelladhäsionen und zur mechanischen Belastbarkeit bei – Prozesse, die häufig durch die Signalgebung von Rho-Familien-GTPasen und eine phosphorylierungsabhängige Modulation der Adduzin-Aktivität koordiniert werden. In erythroiden Zellen und anderen mechanisch stark beanspruchten Geweben unterstützt eine korrekte Adduzin-Funktion die Integrität des Zytoskeletts und die Membranorganisation. Genetische und funktionelle Störungen in Adduzin-Komplexen wurden im Zusammenhang mit Erkrankungen untersucht, die durch Membranfragilität und veränderte Zellmechanik gekennzeichnet sind, darunter zytoskelettale Defekte roter Blutkörperchen sowie weitere Kontexte, in denen das Zytoskelett-Remodeling fehlreguliert ist.
Adducin β Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ADD2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ADD2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ADD2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ADD2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.