Partículas Lentivirales de Activación (h) ADAR1: sc-401611-LAC

ADAR (ADAR1) codifica una adenosina desaminasa que cataliza la edición de ARN de A a I en ARN de doble cadena, remodelando las secuencias de los transcritos, el empalme (splicing) y las interacciones dependientes de la estructura del ARN. Mediante la edición de dsRNA endógeno, ADAR1 limita la activación innata aberrante al reducir el reconocimiento por sensores citosólicos de ARN y, de este modo, modula la señalización de interferón de tipo I y los programas génicos inflamatorios. ADAR1 también influye en el procesamiento de microARN y en la recodificación de transcritos seleccionados, afectando decisiones sobre el destino celular y respuestas al estrés. La actividad desregulada de ADAR1 y los paisajes de edición de ARN se han vinculado con respuestas antivirales alteradas y con la fisiopatología inflamatoria, así como con la remodelación del transcriptoma asociada al cáncer.

Las partículas de activación lentiviral ADAR1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ADAR en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral ADAR1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ADAR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de ADAR1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ADAR y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.