ADAM23 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403703-ACT

ADAM23 kodiert ein Protein mit Disintegrin- und Metalloprotease-Domäne, das vor allem als katalytisch inaktives, an der Zelloberfläche lokalisiertes Adhäsions- und Signalmolekül wirkt. In menschlichen Geweben ist ADAM23 an Zell‑Zell- und Zell‑Matrix-Interaktionen beteiligt und wurde über Interaktionen mit extrazellulären Liganden sowie Integrin-assoziierte Signalwege mit der Regulation der neuronalen Entwicklung, der synaptischen Organisation und der Zellmigration in Verbindung gebracht. Veränderte ADAM23-Expression und epigenetische Regulation wurden in mehreren Krankheitskontexten beschrieben, darunter neurologische Erkrankungen und Krebs, bei denen Veränderungen der Adhäsionssignalgebung und des invasiven Verhaltens relevant sind. Als membranassoziierter Regulator der interzellulären Kommunikation bietet ADAM23 einen nützlichen Ansatzpunkt, um zu untersuchen, wie extrazelluläre Signale intrazelluläre Signalprogramme formen.

ADAM23 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ADAM23-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ADAM23 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ADAM23-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ADAM23-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ADAM23-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ADAM23-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ADAM23-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ADAM23-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ADAM23-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.