Plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAM12 (m): sc-418983

Présentation

ADAM12 (a disintegrin and metalloproteinase 12) est une protéase ancrée à la membrane et un régulateur de l’adhérence qui module le remodelage de la matrice extracellulaire, la signalisation des facteurs de croissance et les interactions cellule–cellule. Dans les tissus murins, ADAM12 contribue au clivage protéolytique (shedding) de protéines de surface cellulaire et influence des voies liées à la myogenèse, à la fibrose et au remodelage stromal, notamment des processus associés à l’EGFR et au TGF-β. Son activité affecte la migration et la différenciation cellulaires ainsi que la mécanotransduction, en modifiant la composition de la MEC et la disponibilité des récepteurs. Une expression ou une activité dérégulée d’ADAM12 a été associée à un remodelage tissulaire pathologique et à des phénotypes liés à l’inflammation, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des mécanismes de maladie dans des contextes musculosquelettiques et fibreux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAM12 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Adam12 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Adam12, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Adam12 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ADAM12.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Adam12 pour l'étude de la signalisation de ADAM12, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Adam12 essentiels à la fonction de ADAM12
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Adam12 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ADAM12 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ADAM12 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Adam12. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ADAM12 plasmide HDR (m) et le ADAM12 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Adam12 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Adam12 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.