Plásmido CRISPR de Activación (h) ADAM12: sc-402583-ACT

ADAM12 codifica una metaloproteasa-disintegrina anclada a la membrana (ADAM12) que regula las interacciones célula–célula y célula–matriz mediante el desprendimiento del ectodominio (ectodomain shedding) de proteínas de superficie y la modulación de la señalización de adhesión. Participa en procesos como la remodelación de la matriz extracelular, la miogénesis y la intercomunicación (crosstalk) de la señalización de factores de crecimiento, influyendo en vías como EGFR/ERBB y la actividad de la red de TGF-β a través del procesamiento proteolítico de sustratos asociados a membrana. La expresión y la actividad de ADAM12 se han vinculado con programas alterados de migración, invasión y diferenciación celular en contextos de fibrosis y biología del cáncer. Estas propiedades hacen de ADAM12 una diana útil para estudiar la señalización dependiente de proteasas, la remodelación del estroma y los mecanismos de desarrollo tisular en modelos celulares humanos.

ADAM12 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ADAM12 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ADAM12 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ADAM12 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ADAM12, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ADAM12. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ADAM12 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ADAM12 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ADAM12 en células tumorales con expresión de ADAM12 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.