ACTL7A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-418969

Descripción general

Actl7a codifica ACTL7A, una proteína similar a la actina con expresión enriquecida en la línea germinal masculina que contribuye a la remodelación del citoesqueleto durante la diferenciación de las espermátidas. ACTL7A se asocia a procesos dependientes de actina que dan forma a la arquitectura de la cabeza de la espermátida, la formación del acrosoma y el ensamblaje del citoesqueleto perinuclear, coordinando los cambios estructurales necesarios para la maduración del espermatozoide. La alteración de estos programas del citoesqueleto puede perjudicar la espermiogénesis, reducir la función espermática y contribuir a fenotipos de infertilidad masculina en sistemas modelo. Como miembro de la familia de la actina con sesgo de expresión hacia el testículo, Actl7a se estudia con frecuencia en vías que regulan el desarrollo de células germinales y la aptitud reproductiva.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ACTL7A (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Actl7a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Actl7a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Actl7a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ACTL7A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Actl7a para la investigación de la señalización de ACTL7A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Actl7a críticos para la función de ACTL7A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Actl7a para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ACTL7A CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ACTL7A CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Actl7a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ACTL7A (m) y el plásmido HDR ACTL7A (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Actl7a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Actl7a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.