Plásmido CRISPR de Activación (h) ACTG1: sc-400006-ACT

ACTG1 codifica la gamma-actina citoplasmática, un componente central del citoesqueleto de actina que sostiene la forma celular, la tensión cortical y la integridad mecánica. Mediante el ensamblaje dinámico de filamentos y sus interacciones con proteínas de unión a actina, ACTG1 contribuye a procesos como la migración celular, la adhesión, la endocitosis y la citocinesis, integrándose con las vías de remodelación del citoesqueleto reguladas por las GTPasas Rho. Las alteraciones en la dosis o la función de ACTG1 pueden perturbar la organización del citoesqueleto y la mecanotransducción, afectando el desarrollo tisular y la homeostasis celular. En humanos, ACTG1 está implicado en trastornos relacionados con la actina que afectan a fenotipos sensoriales y del desarrollo, lo que lo hace relevante para estudios de la dinámica del citoesqueleto y de las respuestas celulares al estrés asociadas a enfermedad.

ACTG1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ACTG1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ACTG1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ACTG1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ACTG1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ACTG1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ACTG1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ACTG1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ACTG1 en células tumorales con expresión de ACTG1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.