Plásmido Doble Nickase (h) ACTA1: sc-400005-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ACTA1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ACTA1 (h) y el plásmido de doble nickasa ACTA1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ACTA1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: α-Actin Anticuerpo (733H2P): sc-517660
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ACTA1 | sc-400005-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ACTA1 | sc-400005-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACTA1 codifica la actina alfa del músculo esquelético, un componente principal del filamento delgado sarcomérico que polimeriza en F-actina para sostener el ensamblaje de las miofibrillas, la generación de fuerza y la mecanotransducción. La dinámica de actina impulsada por ACTA1 se integra con el ciclo de puentes cruzados actina–miosina, la organización del disco Z y las vías de remodelación del citoesqueleto que gobiernan la estructura de la fibra muscular y el rendimiento contráctil. La variación patogénica o la expresión desregulada de ACTA1 se asocia con trastornos hereditarios del músculo esquelético, incluidas las miopatías congénitas, en las que la estabilidad alterada de los filamentos y la mecánica contráctil contribuyen a la disfunción celular. Como marcador y nodo funcional en la biología muscular, ACTA1 se estudia ampliamente en modelos de miogénesis, biogénesis del sarcómero y respuestas al estrés del citoesqueleto.
ACTA1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ACTA1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ACTA1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ACTA1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ACTA1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.