Plasmide CRISPR d'Activation (h) ACSL4: sc-401649-ACT

L’ACSL4 humain (acyl‑CoA synthetase, membre 4 de la famille des longues chaînes) catalyse l’activation, dépendante de l’ATP, des acides gras polyinsaturés à longue chaîne, générant des thioesters d’acyl‑CoA qui orientent les lipides vers le remodelage membranaire et la biosynthèse de lipides complexes. En modulant la composition des phospholipides, ACSL4 influence le métabolisme de l’acide arachidonique, la signalisation des eicosanoïdes et la dynamique de la peroxydation lipidique, à l’interface de l’homéostasie rédox et des voies de mort cellulaire régulée. Une activité altérée d’ACSL4 a été associée à une dérégulation du métabolisme lipidique dans la biologie des cancers, les processus neurodégénératifs et les états inflammatoires, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier la sensibilité à la ferroptose et la reprogrammation métabolique. Son expression et son activité enzymatique établissent des liens mécanistiques entre les flux lipidiques, la fonction mitochondriale et la signalisation des réponses au stress.

ACSL4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ACSL4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ACSL4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ACSL4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ACSL4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ACSL4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ACSL4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ACSL4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ACSL4 dans les cellules tumorales présentant une expression de ACSL4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.