Plásmido CRISPR de Activación (m) ACSL1: sc-420278-ACT

El gen Acsl1 de ratón codifica la acil‑CoA sintetasa 1 de cadena larga (ACSL1), una enzima que activa los ácidos grasos de cadena larga al convertirlos en tioésteres de acil‑CoA, comprometiendo así los sustratos lipídicos con la β‑oxidación, la remodelación de fosfolípidos y la síntesis de triglicéridos. ACSL1 ayuda a coordinar la homeostasis energética celular y el manejo de lípidos a través de vías asociadas a mitocondrias y al retículo endoplásmico (RE), influyendo en procesos como la dinámica de las gotas lipídicas y la composición de membranas. Los cambios en la actividad de ACSL1 y en sus patrones de expresión se estudian con frecuencia en el contexto de la inflamación metabólica, la resistencia a la insulina, la esteatosis hepática y la remodelación lipídica relevante para la salud cardiovascular, donde los desplazamientos en los pools de acil‑CoA pueden reconfigurar la señalización y la función mitocondrial. Como resultado, Acsl1 es un nodo útil para analizar el metabolismo de ácidos grasos, la detección de nutrientes y las respuestas al estrés impulsadas por lípidos en modelos murinos y sistemas celulares.

ACSL1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Acsl1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ACSL1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Acsl1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Acsl1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ACSL1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Acsl1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ACSL1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ACSL1 en células tumorales con expresión de Acsl1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.