ACOT8 Double Nickase Plasmid (h): sc-407262-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ACOT8 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ACOT8 Double-Nickase-Plasmid (h) und ACOT8 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ACOT8 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ACOT8: sc-7343
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ACOT8 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407262-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACOT8 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407262-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACOT8 kodiert die Acyl-CoA-Thioesterase 8, ein peroxisomales Enzym, das Fettsäure-Acyl-CoA-Thioester zu freien Fettsäuren und Coenzym A hydrolysiert und dadurch zur Regulation der intraperoxisomalen CoA-Verfügbarkeit sowie der Größe des Acyl-CoA-Pools beiträgt. Durch die Modulation des Substratflusses durch die peroxisomale β-Oxidation und das Lipid-Remodelling unterstützt ACOT8 die zelluläre Lipidhomöostase und das Redoxgleichgewicht. Seine Aktivität ist mit weiteren peroxisomenassoziierten Prozessen verknüpft, darunter die Verarbeitung sehr langkettiger Fettsäuren und die Koordination mit der mitochondrialen Fettsäureoxidation. Eine Dysregulation peroxisomaler Lipidstoffwechselwege unter Beteiligung von ACOT8 wurde im Kontext metabolischer und inflammatorischer Phänotypen untersucht, bei denen eine veränderte Fettsäurenutzung und oxidativer Stress eine Rolle spielen.
ACOT8 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ACOT8-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ACOT8 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ACOT8-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ACOT8-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.