Plasmide Double Nickase (h) Acid Ceramidase: sc-401495-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Acid Ceramidase correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Acid Ceramidase Double Nickase (h) et le plasmide Acid Ceramidase Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ASAH1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Acid Ceramidase Antibody (23): sc-136275
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Acid Ceramidase | sc-401495-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Acid Ceramidase | sc-401495-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ASAH1 code la céramidase acide, une hydrolase lysosomale qui clive le céramide en sphingosine et en acide gras libre, reliant le catabolisme des sphingolipides à la signalisation via la sphingosine-1-phosphate. En régulant le rhéostat céramide–sphingosine, la céramidase acide influence le renouvellement membranaire, l’homéostasie lysosomale, l’autophagie et des voies sensibles au stress qui modulent la survie cellulaire et la signalisation inflammatoire. Une activité d’ASAH1 dérégulée perturbe l’équilibre des sphingolipides et a été associée à des pathologies de surcharge lysosomale et à des phénotypes neurodégénératifs, ainsi qu’à une signalisation lipidique altérée dans des modèles de cancer et de stress métabolique. ASAH1 est donc largement étudié dans le contexte de la signalisation médiée par les lipides, du contrôle qualité des organites et de la modulation, par les sphingolipides, des décisions de destinée cellulaire.
Acid Ceramidase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ASAH1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ASAH1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ASAH1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ASAH1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.