Plásmido Doble Nickase (h) ACE2: sc-401131-NIC

La enzima convertidora de angiotensina 2 (ACE2) es una carboxipeptidasa dependiente de zinc que contrarresta el sistema renina–angiotensina al convertir la angiotensina II en angiotensina-(1–7), desplazando así la señalización desde ejes vasoconstrictores y proinflamatorios hacia vías vinculadas al receptor MAS. La ACE2 humana se expresa en superficies epiteliales y endoteliales y contribuye a la regulación del tono vascular, la remodelación tisular, las respuestas al estrés oxidativo y la señalización inflamatoria. Además de su función enzimática, ACE2 influye en el tráfico de receptores y en redes de proteasas de membrana que determinan la proteostasis en la superficie celular. La expresión o actividad desregulada de ACE2 se ha asociado con patología cardiovascular y renal, inflamación metabólica y disfunción de la barrera epitelial, lo que la convierte en un objetivo clave para estudios mecanísticos de la respuesta del hospedador y la homeostasis tisular.

ACE2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ACE2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ACE2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ACE2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ACE2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.