Plásmido CRISPR de Activación (m) ACE2: sc-427594-ACT

Ace2 en ratón codifica la enzima convertidora de angiotensina 2 (ACE2), una carboxipeptidasa dependiente de zinc que contrarresta el sistema renina–angiotensina al convertir la angiotensina II en angiotensina-(1–7), desplazando así la señalización hacia el eje del receptor Mas. Mediante la modulación de la disponibilidad de péptidos de angiotensina, ACE2 influye en las vías de señalización MAPK, PI3K/AKT, del óxido nítrico y de la inflamación, que determinan el tono vascular, el estrés oxidativo y la remodelación tisular. En múltiples órganos, incluidos el pulmón, el corazón, el riñón y el intestino, la actividad de ACE2 se asocia con fenotipos cardiopulmonares y metabólicos, respuestas fibróticas y activación inmunitaria en modelos preclínicos. Por ello, las alteraciones en la expresión o la función de Ace2 se analizan con frecuencia en estudios sobre daño de órganos diana asociado a la hipertensión, lesión pulmonar aguda y crónica e inflamación sistémica.

ACE2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ace2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ACE2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ace2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ace2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ACE2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ace2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ACE2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ACE2 en células tumorales con expresión de Ace2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.