ACADS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-418940

Visão geral

Acads codifica a acil-CoA desidrogenase de cadeia curta (ACADS), uma flavoproteína mitocondrial que catalisa a primeira etapa de desidrogenação na β-oxidação de ácidos graxos de cadeia curta. Ao sustentar a produção de acetil-CoA e o fluxo subsequente no ciclo do TCA (ciclo do ácido tricarboxílico), a ACADS ajuda a manter a homeostase energética durante o jejum e a utilização elevada de gorduras, além de se relacionar com o equilíbrio redox por meio da transferência de elétrons dependente de FAD. A disfunção da atividade de ACADS está associada ao acúmulo de acil-CoA de cadeia curta e a perfis alterados de acilcarnitinas, o que a torna relevante para erros inatos da oxidação de ácidos graxos e fenótipos de estresse metabólico. Em modelos murinos, o Acads é comumente estudado no fígado, coração, músculo esquelético e tecido adiposo marrom para compreender o metabolismo mitocondrial, a detecção de nutrientes e o equilíbrio energético sistêmico.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ACADS (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Acads em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Acads, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Acads na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ACADS.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Acads para a investigação da sinalização de ACADS, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Acads críticos para a função ACADS
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Acads para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ACADS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo ACADS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Acads. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ACADS Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR ACADS (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Acads para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Acads definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.