Plasmide CRISPR/Cas9 KO ABR (h): sc-407250

Présentation

ABR (active BCR-related) code une protéine multidomaine activant l’activité GAP des GTPases de la famille Rho, qui module des petites GTPases telles que RAC1 et CDC42, influençant ainsi la dynamique du cytosquelette d’actine, l’adhérence cellulaire, la formation de replis membranaires (ruffling) et le trafic vésiculaire. Grâce à son activité GAP et à ses fonctions d’échafaudage de signalisation, ABR participe à des voies qui relient des signaux induits par les récepteurs au remodelage du cytosquelette et à la motilité cellulaire. Une altération de la signalisation des GTPases Rho régulée par ABR a été associée à des phénotypes de prolifération et de migration dérégulés, pertinents pour la transformation oncogénique et le comportement invasif. ABR est également étudié dans le contexte de la signalisation des cellules immunitaires et de processus neurodéveloppementaux, où un contrôle précis des GTPases de la famille Rho est requis.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ABR (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ABR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ABR, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ABR à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ABR.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ABR pour l'étude de la signalisation de ABR, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ABR essentiels à la fonction de ABR
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ABR pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ABR plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ABR plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ABR. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ABR plasmide HDR (h) et le ABR (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ABR pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ABR définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.