Plasmide CRISPR d'Activation (m) Abin-1: sc-425441-ACT

Le gène murin Tnip1 code ABIN-1 (A20-binding inhibitor of NF-κB), un adaptateur liant l’ubiquitine qui limite la signalisation inflammatoire en aval des voies du récepteur du TNF, des récepteurs de type Toll (TLR) et du récepteur de l’IL‑1. ABIN‑1 coopère avec la déubiquitinase A20/TNFAIP3 pour moduler la signalisation ubiquitine K63 et linéaire (M1) sur des complexes contenant RIPK1 et NEMO/IKK, façonnant ainsi les sorties transcriptionnelles de NF‑κB et des MAPK. Par ces interactions, ABIN‑1 influence l’activation de l’immunité innée, la production de cytokines et les voies de survie cellulaire, ce qui le rend pertinent pour des modèles d’auto-immunité, de maladies inflammatoires et de pathologies tissulaires induites par le système immunitaire. De plus, ABIN‑1 a été associé à la régulation des réponses au stress cellulaire et peut affecter des phénotypes prolifératifs dans des contextes où la signalisation NF‑κB est dérégulée.

Abin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Tnip1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Abin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Tnip1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Tnip1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Abin-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Tnip1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Abin-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Abin-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Tnip1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.