Plásmido CRISPR de Activación (h) ABHD14B: sc-410211-ACT

ABHD14B humano (abhydrolase domain containing 14B) codifica una proteína de la familia de las hidrolasas de serina que, según las predicciones, participa en el metabolismo de lípidos y de pequeñas moléculas mediante actividad hidrolítica, contribuyendo a la homeostasis celular y a la señalización sensible al estrés. Como miembro de la superfamilia de las α/β-hidrolasas, ABHD14B se vincula de forma general con vías que regulan la remodelación de lípidos de membrana, la función mitocondrial y el equilibrio redox, procesos que pueden influir en la proliferación y en las respuestas inflamatorias. La expresión alterada de hidrolasas de esta clase se ha asociado con desregulación metabólica y con la biología tumoral, lo que convierte a ABHD14B en una diana útil para estudios mecanísticos en sistemas donde el manejo de lípidos y la bioenergética están alterados. El análisis funcional de ABHD14B respalda la investigación sobre cómo el control enzimático de señales derivadas de lípidos se integra con programas transcripcionales y transiciones de estado celular.

ABHD14B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ABHD14B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ABHD14B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ABHD14B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ABHD14B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ABHD14B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ABHD14B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ABHD14B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ABHD14B en células tumorales con expresión de ABHD14B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.