Plasmide Double Nickase (h) ABCD4: sc-406750-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ABCD4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ABCD4 Double Nickase (h) et le plasmide ABCD4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ABCD4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ABCD4 | sc-406750-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ABCD4 | sc-406750-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ABCD4 code une protéine apparentée aux transporteurs de la cassette de liaison à l’ATP (ABC) qui intervient dans le traitement lysosomal de la cobalamine (vitamine B12) en permettant l’export de la cobalamine du lysosome vers le cytosol, où elle est convertie en cofacteurs actifs, l’adénosylcobalamine et la méthylcobalamine. Par ce rôle, ABCD4 soutient le métabolisme à un carbone et les voies mitochondriales dépendantes de l’activité de la méthionine synthase et de la méthylmalonyl‑CoA mutase, influençant ainsi l’équilibre de la méthylation et le métabolisme énergétique. Une altération de la fonction d’ABCD4 est associée à des erreurs innées du métabolisme de la cobalamine, avec des signatures biochimiques incluant une reméthylation et/ou un catabolisme du propionate altérés. ABCD4 est donc étudié dans le contexte du trafic lysosomal, de l’homéostasie des cofacteurs et des réponses au stress métabolique.
ABCD4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ABCD4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ABCD4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ABCD4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ABCD4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.