Plasmide CRISPR d'Activation (h) ABCB6: sc-403817-ACT

ABCB6 code un transporteur de la famille des cassettes de liaison à l’ATP (ATP-binding cassette, ABC) localisé principalement dans les mitochondries et impliqué dans le métabolisme des porphyrines et de l’hème, contribuant à la différenciation érythroïde et à l’homéostasie mitochondriale. En régulant la gestion intracellulaire des intermédiaires porphyriniques et de métabolites apparentés, ABCB6 influence les réponses au stress oxydatif ainsi que des processus bioénergétiques plus larges. Une activité altérée d’ABCB6 a été associée à une biosynthèse de l’hème dérégulée, à des phénotypes des globules rouges et à une dysfonction mitochondriale, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du remodelage métabolique et de la signalisation du stress. ABCB6 est également utilisé comme marqueur cellulaire dans certains contextes, permettant des investigations sur la biologie des transporteurs et les voies spécifiques aux organites.

ABCB6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ABCB6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ABCB6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ABCB6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ABCB6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ABCB6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ABCB6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ABCB6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ABCB6 dans les cellules tumorales présentant une expression de ABCB6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.