ABCA2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405934

Übersicht

ABCA2 (ATP-bindendes Kassettentransporterprotein, Unterfamilie A, Mitglied 2) ist ein membranassoziierter Lipidtransporter, der überwiegend in endosomalen und lysosomalen Kompartimenten lokalisiert ist und dort zum intrazellulären Transport von Cholesterin und Sphingolipiden beiträgt. Als ABC-Transporter koppelt ABCA2 die ATP-Hydrolyse an die Translokation von Substraten und beeinflusst dadurch Vesikeldynamik, Membranzusammensetzung und Lipidhomöostase. Eine dysregulierte ABCA2-Expression und veränderte Lipidverarbeitung wurden mit neurodegenerationsassoziierten Signalwegen in Verbindung gebracht, darunter die Prozessierung des Amyloid-Vorläuferproteins und das neuronale Lipidgleichgewicht. ABCA2 wird zudem im Kontext zellulärer Stressantworten und von Multidrug-Transport-Phänotypen untersucht, was es für mechanistische Studien in Krebs- sowie Nervensystem-Modellen relevant macht.

Das ABCA2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ABCA2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ABCA2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ABCA2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ABCA2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ABCA2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ABCA2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ABCA2-Exone abzielen, die für die ABCA2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ABCA2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ABCA2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ABCA2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ABCA2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ABCA2 HDR-Plasmid (h) und ABCA2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ABCA2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ABCA2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.