ABC1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401086-ACT

Humanes ABCA1 (ABC1) kodiert einen ATP-bindenden Kassettentransporter, der Cholesterin und Phospholipide auf lipidarme Apolipoproteine exportiert, dadurch die Bildung naszierender HDL initiiert und den reversen Cholesterintransport unterstützt. Die ABC1-Aktivität ist in die durch LXR/RXR regulierte Lipidhomöostase eingebunden und beeinflusst die Membranzusammensetzung, die Organisation von Lipid-Rafts sowie entzündliche Signalwege in Makrophagen und anderen Zelltypen. Eine fehlregulierte ABCA1-Expression oder -Funktion stört das zelluläre Cholesteringleichgewicht und wurde mit atheroskleroseassoziierten Phänotypen, neurodegenerativen Prozessen und veränderten Immunzellantworten in Verbindung gebracht. Als zentraler Knotenpunkt in Cholesterin-Efflux‑Signalwegen wird ABCA1 in der Lipoproteinbiologie, der kardiometabolischen Forschung und bei Mechanismen, die den Lipidstoffwechsel mit Entzündung verknüpfen, umfassend untersucht.

ABC1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ABCA1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ABC1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ABCA1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ABCA1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ABC1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ABCA1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ABC1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ABC1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ABCA1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.