Plasmide Double Nickase (h) A-Raf: sc-401799-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) A-Raf correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide A-Raf Double Nickase (h) et le plasmide A-Raf Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ARAF. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: A-Raf Antibody (A-5): sc-166771
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) A-Raf | sc-401799-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) A-Raf | sc-401799-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ARAF code la kinase sérine/thréonine A‑Raf, membre de la famille RAF, qui relie le RAS activé à la cascade de signalisation MAPK/ERK. Par une activation et une dimérisation régulées, A‑Raf contribue à la phosphorylation de MEK et au contrôle en aval des programmes de prolifération, de différenciation et de survie cellulaires. L’activité d’ARAF s’articule avec la signalisation des récepteurs aux facteurs de croissance et peut influencer la régulation par rétrocontrôle au sein de la voie ERK, ainsi que les interactions croisées avec la signalisation PI3K–AKT. Une dérégulation de la signalisation RAF–MEK–ERK, notamment via une utilisation altérée des isoformes RAF, est largement pertinente pour les réseaux de signalisation oncogéniques et pour la modélisation, dans des cellules humaines, de dépendances aux voies qui varient selon le contexte.
A-Raf Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ARAF dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ARAF. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ARAF. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ARAF.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.