Plásmido CRISPR de Activación (h) 53BP2: sc-403004-ACT

TP53BP2 codifica 53BP2 (también conocida como ASPP2), un adaptador multifuncional que modula programas transcripcionales que gobiernan el control del ciclo celular, la apoptosis y las respuestas al estrés mediante interacciones con proteínas de la familia p53 y otros socios de señalización. 53BP2 contribuye a la regulación de los puntos de control asociados al daño en el ADN e influye en la dinámica del citoesqueleto y de las uniones celulares, lo que puede afectar la polaridad celular y la migración. La desregulación de la expresión de TP53BP2 o de sus redes de interacción se ha asociado con una competencia apoptótica alterada y con cambios en la señalización de la vía supresora tumoral en diversos contextos de cáncer. Como regulador nodal de la transcripción dependiente de p53, TP53BP2 se estudia con frecuencia para aclarar mecanismos de estabilidad genómica, muerte celular programada y transformación oncogénica.

53BP2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TP53BP2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

53BP2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TP53BP2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TP53BP2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de 53BP2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TP53BP2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de 53BP2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía 53BP2 en células tumorales con expresión de TP53BP2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.