Plasmide Double Nickase (h) 53BP1: sc-400321-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) 53BP1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide 53BP1 Double Nickase (h) et le plasmide 53BP1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TP53BP1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: 53BP1 Antibody (E-10): sc-515841
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) 53BP1 | sc-400321-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) 53BP1 | sc-400321-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TP53BP1 code pour 53BP1, un facteur de la réponse aux dommages de l’ADN associé à la chromatine, qui s’accumule au niveau des cassures double brin grâce à la reconnaissance de marques d’histones et en coopération avec des capteurs en amont tels qu’ATM. 53BP1 favorise la jonction d’extrémités non homologues (NHEJ) et limite la résection des extrémités d’ADN, influençant ainsi le choix de la voie de réparation, en opposition à la recombinaison homologue dépendante de BRCA1. Par ces activités, elle contribue à la stabilité du génome, à la progression de la phase S et à la signalisation des points de contrôle, et sa dérégulation est impliquée dans la charge mutationnelle et les réarrangements chromosomiques observés dans de multiples contextes cancéreux. TP53BP1 est également largement utilisé comme lecture fonctionnelle de la formation de foyers de dommages à l’ADN et de la compétence de réparation dans des études portant sur le stress de réplication et les réponses génotoxiques.
53BP1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TP53BP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TP53BP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TP53BP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TP53BP1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.