Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Plasmide CRISPR/Cas9 KO 53BP1 (m2): sc-424212-KO-2
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- 53BP1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m2) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique 53BP1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: p-53BP1 Antibody (38.Ser 25): sc-135748
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO 53BP1 (m2) | sc-424212-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Trp53bp1 code 53BP1, un médiateur associé à la chromatine de la réponse aux dommages de l’ADN, rapidement recruté sur les cassures double brin via la reconnaissance de marques histoniques et la signalisation par l’ubiquitine. 53BP1 favorise la jonction d’extrémités non homologues (NHEJ) et limite la résection des extrémités de l’ADN, influençant ainsi le choix de voie entre la NHEJ et la recombinaison homologue au cours de la réparation. Il coordonne la signalisation des points de contrôle, la stabilité génomique et la recombinaison de commutation de classe dans les cellules B, et son dysfonctionnement est associé à une instabilité chromosomique accrue et à des réponses modifiées au stress de réplication. Dans des modèles murins, la perturbation de Trp53bp1 est largement utilisée pour étudier la maintenance du génome, les réseaux suppresseurs de tumeurs et l’équilibre des voies de réparation associées à BRCA1.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO 53BP1 (m2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Trp53bp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Trp53bp1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Trp53bp1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine 53BP1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Trp53bp1 pour l'étude de la signalisation de 53BP1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Trp53bp1 essentiels à la fonction de 53BP1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Trp53bp1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le 53BP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le 53BP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Trp53bp1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le 53BP1 plasmide HDR (m) et le 53BP1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Trp53bp1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Trp53bp1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.