5-LO Double Nickase Plasmid (m): sc-419091-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das 5-LO Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- 5-LO Double-Nickase-Plasmid (m) und 5-LO Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Alox5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: 5-LO: sc-136195
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
5-LO Double Nickase Plasmid (m) | sc-419091-NIC | 20 µg | $410.00 |
Maus-Alox5 kodiert die 5‑Lipoxygenase (5‑LO), eine nicht-hämhaltige Eisen-Dioxygenase, die die ersten festgelegten Schritte der Leukotrienbiosynthese aus Arachidonsäure katalysiert. In Zusammenarbeit mit FLAP (ALOX5AP) bildet 5‑LO LTA4, das anschließend zu LTB4 und Cysteinyl-Leukotrienen weiterverarbeitet wird – zentrale Lipidmediatoren, die die Rekrutierung von Leukozyten, die Gefäßpermeabilität und die angeborene Immun-Signalübertragung steuern. Die Aktivität von ALOX5 wird durch calciumabhängige Translokation an Membranen und durch Phosphorylierung reguliert und integriert damit rezeptorvermittelte Signalwege, die inflammatorische Genprogramme modulieren. Eine fehlregulierte 5‑LO/Leukotrien-Signalgebung wurde mit Modellen einer asthmaähnlichen Atemwegsentzündung, Atherosklerose, Neuroinflammation und tumorassoziierten myeloiden Phänotypen in Verbindung gebracht, was Alox5 zu einem hilfreichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Eicosanoid-Netzwerken macht.
5-LO Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Alox5-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Alox5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Alox5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Alox5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.