Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
4.1N Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420184
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- 4.1N El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico 4.1N, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: 4.1N Anticuerpo (B-2): sc-374367
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
4.1N Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420184 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Epb41l1 codifica la proteína 4.1N, un miembro de la familia de proteínas 4.1 enriquecido en neuronas que conecta la red cortical de actina/espectrina con la membrana plasmática para estabilizar la forma celular y la mecánica de la membrana. 4.1N actúa como un factor de andamiaje en las membranas y sinapsis neuronales, coordinando el ensamblaje de complejos proteicos que influyen en el crecimiento de neuritas, la organización sináptica y el tráfico vesicular. A través de estas funciones de acoplamiento entre el citoesqueleto y la membrana, Epb41l1 contribuye a procesos como la guía axonal y la remodelación dependiente de la actividad, que son centrales para el desarrollo y la plasticidad del sistema nervioso. La desregulación de la arquitectura membrana–citoesqueleto asociada a 4.1N es relevante en estudios de mecanismos del neurodesarrollo y la neurodegeneración, donde la conectividad y la excitabilidad neuronales alteradas son fenotipos celulares clave.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO 4.1N (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Epb41l1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Epb41l1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Epb41l1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína 4.1N.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Epb41l1 para la investigación de la señalización de 4.1N, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Epb41l1 críticos para la función de 4.1N
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Epb41l1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido 4.1N CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido 4.1N CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Epb41l1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR 4.1N (m) y el plásmido HDR 4.1N (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Epb41l1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Epb41l1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.