Plásmido CRISPR de Activación (h) 3PGDH: sc-401405-ACT

El gen humano **PHGDH** codifica la **3-fosfoglicerato deshidrogenasa (3PGDH)**, la primera enzima y la limitante de la velocidad de la vía de biosíntesis *de novo* de serina, que desvía el intermediario glucolítico **3-fosfoglicerato** hacia la **L-serina** y el metabolismo downstream de **un carbono**. Mediante el control de los reservorios de serina y glicina, PHGDH influye en la síntesis de nucleótidos, las reacciones de metilación y el equilibrio redox celular a través del metabolismo acoplado a **NADH/NADPH**. La desregulación de PHGDH se ha vinculado a la reprogramación metabólica en estados proliferativos y a fenotipos neurometabólicos en los que la disponibilidad de serina limita procesos biosintéticos relacionados con proteínas, lípidos y neurotransmisores. Como nodo de la vía que conecta la glucólisis con el flujo de aminoácidos y del ciclo del folato, la 3PGDH se investiga con frecuencia en estudios de dependencia de nutrientes, comunicación metabólica mitocondria–citosol y adaptación al estrés.

3PGDH El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PHGDH sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

3PGDH El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PHGDH en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PHGDH, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de 3PGDH. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PHGDH y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de 3PGDH en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía 3PGDH en células tumorales con expresión de PHGDH silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.