Plásmido Doble Nickase (h) 3β-HSD: sc-400825-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)3β-HSD consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa 3β-HSD (h) y el plásmido de doble nickasa 3β-HSD (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a HSD3B1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) 3β-HSD | sc-400825-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) 3β-HSD | sc-400825-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSD3B1 codifica la 3β-hidroxiesteroide deshidrogenasa/isomerasa Δ5-Δ4 de tipo 1 (3β-HSD), una enzima microsomal que cataliza pasos clave de la esteroidogénesis al convertir los 3β-hidroxiesteroides Δ5 en sus productos cetosteroides Δ4, incluida la conversión de pregnenolona en progesterona y de dehidroepiandrosterona en androstenediona. A través de estas reacciones, regula el flujo a través de las vías biosintéticas de andrógenos, estrógenos, glucocorticoides y mineralocorticoides, e influye en la disponibilidad celular de hormonas esteroideas. Las alteraciones en la actividad o la expresión de HSD3B1 pueden modificar el metabolismo esteroideo intracrino y se estudian en contextos en los que se ven perturbadas la señalización y la diferenciación dependientes de hormonas, incluidos ámbitos de la biología endocrina y reproductiva y modelos de enfermedades sensibles a hormonas.
3β-HSD El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HSD3B1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HSD3B1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HSD3B1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HSD3B1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.