Plásmido CRISPR de Activación (h) 20S Proteasome β3: sc-409667-ACT

PSMB3 codifica la subunidad β3 del núcleo catalítico del proteasoma 20S humano, un componente estructural del proteasoma 26S que permite la degradación dependiente de ATP de proteínas ubiquitinadas. La proteólisis mediada por el proteasoma regula el control de calidad proteico, el procesamiento de antígenos y la progresión del ciclo celular, y se interconecta con vías que controlan las respuestas al estrés, la señalización por daño del ADN y la actividad de NF-κB. Las alteraciones en la expresión de subunidades del proteasoma pueden reconfigurar la proteostasis y modificar la degradación de proteínas reguladoras de vida corta, influyendo en la apoptosis, la proliferación y la señalización inmunitaria. La disfunción del proteasoma y los cambios en la composición de sus subunidades se han asociado con la biología del cáncer, la neurodegeneración y la fisiopatología inflamatoria debido a sus efectos amplios sobre la homeostasis proteica.

20S Proteasome β3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PSMB3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

20S Proteasome β3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PSMB3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PSMB3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de 20S Proteasome β3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PSMB3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de 20S Proteasome β3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía 20S Proteasome β3 en células tumorales con expresión de PSMB3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.