Plásmido Doble Nickase (h) 15-LO: sc-401591-NIC

El gen humano **ALOX15** codifica la **15-lipoxigenasa-1 (15-LO)**, una dioxigenasa de hierro no hemo que cataliza la oxigenación de ácidos grasos poliinsaturados como el ácido araquidónico y el linoleico para generar **15-HETE** y **13-HODE**. Estos mediadores lipídicos moldean las redes de eicosanoides y de lípidos especializados pro-resolutivos, que influyen en la señalización inflamatoria, el equilibrio redox y la remodelación de los lípidos de membrana. La actividad de **ALOX15** está implicada en la polarización de macrófagos, la diferenciación epitelial y las respuestas al estrés oxidativo mediante la interacción con vías que incluyen **NF-κB**, la señalización de **PPAR** y el metabolismo lipídico regulado por citocinas. La expresión o actividad desregulada de **15-LO** se ha asociado con trastornos inflamatorios, procesos ateroscleróticos y funciones dependientes del contexto en la biología tumoral, lo que la convierte en un objetivo útil para estudios mecanísticos de la señalización impulsada por lípidos.

15-LO El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ALOX15 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ALOX15. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ALOX15. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ALOX15 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.