Plasmide Double Nickase (h) 15-LO: sc-401591-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) 15-LO correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide 15-LO Double Nickase (h) et le plasmide 15-LO Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ALOX15. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: 15-LO Antibody (B-7): sc-133085
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) 15-LO | sc-401591-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) 15-LO | sc-401591-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’ALOX15 humain code la 15‑lipoxygénase‑1 (15‑LO), une dioxygénase à fer non héminique qui catalyse l’oxygénation d’acides gras polyinsaturés tels que l’acide arachidonique et l’acide linoléique, afin de générer le 15‑HETE et le 13‑HODE. Ces médiateurs lipidiques structurent les réseaux des eicosanoïdes et des lipides spécialisés pro‑résolutifs, qui influencent la signalisation inflammatoire, l’équilibre rédox et le remodelage des lipides membranaires. L’activité d’ALOX15 est impliquée dans la polarisation des macrophages, la différenciation épithéliale et les réponses au stress oxydant via des interactions avec des voies incluant NF‑κB, la signalisation PPAR et le métabolisme lipidique régulé par les cytokines. Une expression ou une activité dérégulée de la 15‑LO a été associée à des troubles inflammatoires, à des processus athéroscléreux et à des rôles dépendant du contexte en biologie tumorale, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la signalisation pilotée par les lipides.
15-LO Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ALOX15 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ALOX15. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ALOX15. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ALOX15.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.