Plasmide Double Nickase (h) 11β-HSD2: sc-401400-NIC

HSD11B2 code la 11β‑hydroxystéroïde déshydrogénase de type 2 humaine (11β‑HSD2), une oxydoréductase dépendante du NAD+ qui inactive le cortisol en cortisone et protège ainsi la signalisation du récepteur des minéralocorticoïdes contre un excès de glucocorticoïdes. Cette enzyme constitue un déterminant majeur du métabolisme pré‑récepteur des hormones stéroïdiennes et contribue à l'homéostasie électrolytique dans les épithéliums sensibles aux minéralocorticoïdes, notamment le rein et le côlon. Une expression ou une activité altérée de HSD11B2 est associée à une dérégulation de la signalisation des corticostéroïdes et à des phénotypes compatibles avec un excès apparent de minéralocorticoïdes, ce qui la rend pertinente pour l'étude de la biologie de l'hypertension et de la régulation endocrinienne. La 11β‑HSD2 est également étudiée dans le placenta et les tissus vasculaires pour son rôle dans la modulation de l'exposition locale aux glucocorticoïdes et des programmes transcriptionnels en aval.

11β-HSD2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HSD11B2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HSD11B2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HSD11B2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HSD11B2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.