μ-protocadherin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406015
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- μ-protocadherin Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im μ-protocadherin-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: µ-protocadherin: sc-166953
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
μ-protocadherin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-406015 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
CDHR5 kodiert μ-Protocadherin, ein calciumabhängiges Zell-Zell-Adhäsionsmolekül, das in Epithelgeweben angereichert ist und dort zur Organisation apikaler Zellkontakte, zur Aufrechterhaltung der Polarität und zur Integrität der Barriere beiträgt. Über homophile Interaktionen sowie die Anbindung an zytoskelettale und junctionale Komplexe unterstützt μ-Protocadherin die Koordination der epithelialen Morphogenese und kontaktabhängiger Signalwege, die Differenzierung und Gewebearchitektur beeinflussen. Eine veränderte CDHR5-Expression wurde mit epithelialem Remodeling und fehlregulierten Adhäsionsprogrammen in gastrointestinalen und anderen epithelialen Pathologien in Zusammenhang gebracht. Als membranständiger Adhäsionsrezeptor wird CDHR5 häufig in Studien zur Stabilität von Zellkontakten, zur epithelialen Plastizität und zu mikroumgebungsabhängigen Phänotypen untersucht.
Das μ-protocadherin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CDHR5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CDHR5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CDHR5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die μ-protocadherin-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CDHR5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der μ-protocadherin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf CDHR5-Exone abzielen, die für die μ-protocadherin-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere CDHR5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom μ-protocadherin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom μ-protocadherin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CDHR5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das μ-protocadherin HDR-Plasmid (h) und μ-protocadherin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CDHR5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CDHR5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.