Plásmido Doble Nickase (h) γ-GCSc: sc-401133-NIC

GCLC codifica la subunidad catalítica de la ligasa glutamato–cisteína (γ-GCSc), la enzima limitante de la velocidad en la biosíntesis de glutatión que cataliza la formación de γ-glutamilcisteína. Al controlar los reservorios celulares de glutatión, γ-GCSc contribuye a la homeostasis redox, la detoxificación de electrófilos y el mantenimiento de la capacidad antioxidante mitocondrial y citosólica, con efectos posteriores sobre la señalización sensible a las ROS y la adaptación metabólica. La actividad de GCLC está estrechamente regulada en las vías de respuesta al estrés oxidativo, incluidos los programas transcripcionales impulsados por NRF2/KEAP1, e influye en la susceptibilidad a la ferroptosis y a otros mecanismos de muerte celular inducidos por estrés. La desregulación del metabolismo del glutatión dependiente de GCLC se ha asociado con respuestas alteradas al estrés oxidativo y a los xenobióticos en contextos como la enfermedad hepática, la neurodegeneración y la biología del cáncer.

γ-GCSc El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GCLC en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GCLC. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GCLC. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GCLC alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.