γ-FR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403347-ACT

O FOLR3 humano codifica o receptor de folato γ (γ-FR), um membro da família de receptores de folato associado a glicosilfosfatidilinositol (GPI), implicado na ligação ao folato e na homeostase celular do folato, sustentando o metabolismo de um carbono necessário para a biossíntese de nucleotídeos e reações de metilação. Por meio de sua relação com a disponibilidade de folato, o γ-FR conecta-se a vias que influenciam a replicação e o reparo do DNA, o equilíbrio redox e a regulação epigenética — processos que frequentemente estão alterados em células de rápida proliferação ou metabolicamente reprogramadas. A variação na expressão de receptores de folato tem sido investigada em contextos de biologia de células hematopoéticas e do sistema imune e em doenças nas quais o metabolismo do folato e o estado de metilação contribuem para programas transcricionais alterados. Como proteína de superfície associada à ligação de folato, o γ-FR também oferece uma ferramenta acessível para estudar o manejo de nutrientes mediado por receptor e os fenótipos metabólicos a jusante em modelos de células humanas.

γ-FR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FOLR3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

γ-FR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FOLR3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FOLR3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de γ-FR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FOLR3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de γ-FR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via γ-FR em células tumorais com expressão de FOLR3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.