Plásmido CRISPR de Activación (h) γ-FR: sc-403347-ACT

El FOLR3 humano codifica el receptor de folato γ (γ-FR), un miembro de la familia de receptores de folato asociado a glicosilfosfatidilinositol, implicado en la unión al folato y en la homeostasis celular del folato, y que sostiene el metabolismo de un carbono necesario para la biosíntesis de nucleótidos y las reacciones de metilación. A través de su conexión con la disponibilidad de folato, el γ-FR se vincula con vías que influyen en la replicación y reparación del ADN, el equilibrio redox y la regulación epigenética, procesos que con frecuencia se alteran en células de rápida proliferación o con reprogramación metabólica. La variación en la expresión de receptores de folato se ha explorado en contextos de biología de células hematopoyéticas e inmunitarias y en enfermedades en las que el metabolismo del folato y el estado de metilación contribuyen a programas transcripcionales alterados. Como proteína de unión al folato asociada a la superficie, el γ-FR también ofrece una herramienta accesible para estudiar el manejo de nutrientes mediado por receptores y los fenotipos metabólicos posteriores en modelos celulares humanos.

γ-FR El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FOLR3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

γ-FR El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FOLR3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FOLR3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de γ-FR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FOLR3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de γ-FR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía γ-FR en células tumorales con expresión de FOLR3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.