Plasmide CRISPR/Cas9 KO γENaC (m): sc-422827

Présentation

Scnn1g code la sous-unité γ du canal sodique épithélial (γENaC), un déterminant majeur de l’entrée de Na⁺ sensible à l’amiloride à travers les membranes apicales des tissus épithéliaux. Avec les sous-unités α et β, γENaC régule le transport transépithélial du sodium, qui influence l’homéostasie du liquide de surface des voies aériennes, la réabsorption rénale du sodium et l’équilibre du volume hydrique. L’activité du canal est contrôlée par le clivage protéolytique et le trafic membranaire, en s’intégrant aux programmes dépendants de l’aldostérone et aux réseaux en aval de transport ionique, tels que la gestion du sel couplée à la Na⁺/K⁺-ATPase. Un dérèglement des sous-unités d’ENaC a été associé à des phénotypes d’hydratation épithéliale et d’équilibre salin altérés, ce qui étaye sa pertinence pour l’étude de la physiologie des voies aériennes et du rein, ainsi que des troubles du transport ionique associés.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO γENaC (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Scnn1g dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Scnn1g, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Scnn1g à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine γENaC.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Scnn1g pour l'étude de la signalisation de γENaC, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Scnn1g essentiels à la fonction de γENaC
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Scnn1g pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le γENaC plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le γENaC plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Scnn1g. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le γENaC plasmide HDR (m) et le γENaC (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Scnn1g pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Scnn1g définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.