Plásmido Doble Nickase (h) γ1-Adaptin: sc-403986-NIC

AP1G1 codifica la subunidad γ1-adaptina humana del complejo de proteínas adaptadoras AP-1, un componente central del tráfico vesicular mediado por clatrina en la red trans-Golgi y los endosomas. La γ1-adaptina ayuda a acoplar las señales de clasificación de la carga al ensamblaje de la cubierta de clatrina, favoreciendo la formación de transportadores que regulan el reciclaje de receptores, la entrega a lisosomas y la distribución polarizada de proteínas de membrana. A través de sus funciones en la clasificación endosomal y el transporte intracelular, AP1G1 influye en la homeostasis de receptores de señalización y en la composición de la membrana, procesos que se investigan con frecuencia en estudios de neurobiología, inmunidad y respuestas al estrés celular. La desregulación de la función del complejo adaptador y de las vías de tráfico endosomal se ha asociado con fenotipos del desarrollo y neurológicos, y puede modular la susceptibilidad a la entrada y replicación de patógenos, lo que convierte a AP1G1 en un nodo útil para la investigación mecanística de vías.

γ1-Adaptin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus AP1G1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de AP1G1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de AP1G1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con AP1G1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.