β-TrCP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400971-ACT

BTRC codifica a proteína humana de caixa F β-TrCP, um componente de reconhecimento de substratos do complexo de ligase E3 de ubiquitina SCF (SKP1–CUL1–F-box), que direciona a ubiquitinação dependente de fosfodegron e a degradação proteassomal de diversas proteínas regulatórias. Por meio dessa atividade, a β-TrCP integra sinalização e proteostase em vias como NF-κB (via regulação de IκB), Wnt/β-catenina, controle do ciclo celular e respostas a dano no DNA, moldando assim programas transcricionais e a integridade dos checkpoints. Alterações na expressão de BTRC ou no direcionamento de seus substratos podem perturbar a sinalização inflamatória, a proliferação e a estabilidade genômica — processos frequentemente implicados na biologia do câncer e em outros mecanismos de doenças complexas. Como a β-TrCP possui um amplo espectro de substratos, ela é comumente estudada para mapear a reorganização de redes mediada por ubiquitina e o “cross-talk” entre vias sob estímulos definidos.

β-TrCP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BTRC sem alterar a sequência de ADN subjacente.

β-TrCP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BTRC em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BTRC, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de β-TrCP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BTRC nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de β-TrCP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via β-TrCP em células tumorais com expressão de BTRC silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.